核酸提取(核酸提取方法介绍)

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核酸提取(核酸提取办法介绍)

核酸是由许多核苷酸聚合百思特网成的生物大分子化合物,是性命最根本的物资之一。核酸存在于所有动物细胞、植物细胞、微生物内、生物体内的核酸常与蛋白质联合形成核蛋白。不同的核酸的化学组成、核苷酸排列次序都不同。核酸重要包含RNA(核糖核酸)和DNA(脱氧核糖核酸),其中DNA是储存、复制和传递遗传信息的重要物资基本。

核酸提取的原则首先保证核酸一级构造的完全性,其次要消除其它分子的污染。

提取核酸时要注意简化步骤,缩短提取时光;减少化学因素对核酸的降解;减少物理因素对核酸的降解:机械剪切力和高温;防止核酸的生物降解。

核酸提取大致分为3大部分:破碎、提取、纯化

细胞裂解法

1.物理方法:煮沸法、玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法、匀浆法

2.化学方法:表面活性剂(SDS法)、碱裂解法

3.生物方法:酶法(溶菌酶、蛋白酶K等)

常见样本提取办法总结

浓盐法:应用RNA和DNA在盐溶液中溶解度不同,将二者分别

有机溶剂提取法:有机溶剂作为蛋白变性剂,同时克制核酸酶的降解作用

高度梯度离心法:应用不同内容物密度不同的原理分别各种内容物

吸附材质联合法:①硅质材质 高盐低PH值联合核酸,低盐高PH值洗脱②阴离子交流树脂 低盐高百思特网PH值联合核酸,高盐低PH值洗脱③磁珠 磁珠微粒包裹上不同基因可吸附不同的目标物,从而到达分别目标

胍盐提取联合二氧化硅吸附法

二氧化硅具有特异吸附核酸的特征,异硫氰酸胍可使细胞裂解,因此在高浓度异硫氰酸胍存在下,从细胞包含细菌或者病毒颗粒中释放出来的核酸成分可以联合在二氧化硅上,应用此特征可提取血液和尿液中的DNA和RNA

Express RN百思特网A迅速提取试剂

先达基因的RNA迅速提取试剂,可在5min之内迅速完成对组织、血液、拭子、细胞等不同少量以及微量样品中病毒的RNA提取和纯化。应用产品提取获得的RNA可直接运用于核酸扩增及检测、体外逆转录、基因克隆、文库构建、杂交等多种生物学试验及研讨。

离心柱提取

离心柱技巧是用于微量核酸分别纯化的较为简略的办法,属于硅吸附办法的一种,在原理上可分为三个部分:

①应用裂解液促使细胞破碎,使细胞中的核酸释放出来。

②把释放出来的核酸特异吸附在特定的硅载体上,这种载体只对核酸有较强的亲和力和吸附力,对其他生化成分如蛋白质、多糖、脂类则根本不吸附,因而离心时被甩出柱子。

③把吸附在特异载体上的核酸用洗脱液洗脱下来,分别得到纯化的核酸。

磁珠法

根据与硅胶膜离心柱雷同的原理,应用纳米技巧对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改进和表面润饰后,制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地辨认和高效联合。应用氧化硅纳米微球的超顺磁性,在Chaotropic盐(盐酸胍、异硫氰酸胍等)和外加磁场的作用下,能从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中的DNA和RNA分别出来,可运用于临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、分子生物学研讨等多种范畴。