酵母菌计数(微生物细胞数的计数)

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酵母菌计数(微生物细胞数的计数)

一、目标

懂得血球计数板的构造,控制应用和盘算办法。

二、仪器与材质

显微镜、血球计数板、移液管、酵母菌液(预备见附录)。

三、血球计数板的构造和盘算办法

血球计数板由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成。玻片中央刻有四条槽,中央两条槽之间的平面比其他平面略低,中央有一小槽,槽的两边的平面上各刻有9个慷慨格,中央的一个慷慨格为计数室,其长和宽各为1mm,深度为0.1mm,其体积为0.1mm3。计数室有两种规格:一种是把慷慨格分成16中格,每一中格分成25小格,共400小格;另一种规格是把慷慨格分成25中格,每一中格分成16小格,总共也是400小(原创版权www.isoyu.com)格。盘算办法如下:

1.1625的计数板盘算公式

细胞数/ml:100小格内的细胞数/100400101000稀释倍数。

2.2516的计数板盘算公式

细胞数/ml:80小格内的细胞数/80400101000稀释倍数。

四、操作步骤

(1)稀释样品,为了便于计数,将样品恰当稀释,使每格约含5个细胞。

(2)取清洁的血球计数板,用厚盖玻片盖住中央的计数室,用移液管汲取少许充足摇匀的待测菌液于盖玻片的边沿,菌液则自行渗入计数室,静置5~10分钟即可计数。

(3)将血球计数板置于载物台上,用低倍镜找到小方格后换高倍镜视察计数。需不断地上、下旋动细调节器,以便看到计数室内不同深度的菌体。现以1625规格的计数板为例,数四个角(左上、右上、左下、右下)的四个中格(即100小格)的酵母菌数。如果是2516规格的计数板,除取四个角上四中格外,还取正中的一个中格(即80小格)。对位于大格线上的酵母菌只计大格的上方及左方线上的酵母菌,或只计下方及右方线上的酵母菌。

每个样品反复计数3次,取平均值,再按公式盘算每毫升菌液中所含的酵母菌数。

图6-1 血球计数板的构造图

(4)洗涤血球计数板。

应用完毕后,将血球计数板在水龙头上用水柱冲刷,切勿用硬物洗刷,洗完后自行晾干或用吹风机吹干。镜检,视察每小格内是否有残留菌体或其他沉淀物。若不清洁,则必需反复洗百思特网涤至清洁为止。

思考题

1.成果:将成果记载于下表中。A表现5个中方格中的总菌数;B表现菌液稀释倍数。

2516的计数板视察计数记载成果

1625的计数板视察计数记载成果

2.为什么用两种百思特网不同规格的计数板测同一样品时,其成果一样?

3.在计数板计数操作进程中,解释血球计数板计数的误差重要来自哪些方面?应如何尽量减少误差,力求精确?

4.如何准确应用计数板计数?其操作步骤和工作原理是什么百思特网?如何进行盘算?

5.除计数板可以进行微生物细胞计数外,还有哪些办法可以进行细胞计数?