大花蕙兰组织培养工厂化生产技术

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(1)引发和诱导(1)选择母株。母株的选择应遵循三个基本原则:1 .整个种群表现出该品种的典型特征;2.种群生长良好,无特定疾病的一般感染,尤其是东亚兰花花叶病毒和弹状病毒;3.在满足上述条件的群体中,选择性状优良的强单株作为母株。(2)外植体的处理。选择叶片未完全展开的肥胖营养芽(非花芽)作为外植体,先剥下2 ~ 3片外叶,然后托住兰叶的芽尖,切掉基(原创www.isoyu.com版权)果和受损老化组织,最后逐层剥下外叶,直至露出小顶芽和小侧芽。然后将外植体在超净工作台上用70%酒精浸泡30秒,用无菌水冲洗,用0.1%氯化汞溶液浸泡8分钟左右,用无菌水冲洗3 ~ 4次,然后在无菌接种盘上小心地剪去顶芽和侧芽。(3)圆球茎的诱导和驯化。将切好的顶芽和侧芽插入诱导培养基,基部向下,芽尖微露。然后放入培养室培养,光照强度1000 ~ 1500勒克斯,光照时间14小时,培养温度25℃左右。10天后,芽开始萌发,诱导率达85%以上。在圆球茎的诱导过程中,约80%的芽萌发,容易长成小苗。诱导30天后,当幼苗长到4厘米,基部膨大时,将幼苗从基部切下,将膨大的基部纵向切成3-4毫米厚的薄片,然后向下放入相同的新鲜培养基中。30-35天后,下部切口可长出类似愈伤组织的圆形鳞茎,其中顶芽诱导率最高,诱导速度最快,其次是侧芽。

二、继代增殖和幼苗分化:将圆球茎接种到继代培养基中,然后放入培养室培养。培养温度25℃左右,光照强度3000勒克斯,每天光照时间10小时。每45 ~ 50天传代培养一次,增殖次数可达10次以上。浓度为1.5×10-6 ~ 2×10-6的6-BA(植物生长调节剂)在继代培养初期能快速积累物质。随着继代次数的增加,特别是第15代以后或突变体植株出现后,只能使用浓度为0.5×10-6 ~ 1.5×10-6的6-BA,可用于生产,突变后的圆球茎表面只有光滑,没有芽尖,不能分化成芽。当圆球茎的数量继代培养到所需数量时,将完整的圆球茎直接转移到新鲜的繁殖培养基中,不需要切割或切断芽尖,使圆球茎表面的芽尖直接分化萌发成苗。

3.生根和炼苗当幼苗长到3厘米高,有2-3片叶子时,可以小心地将幼苗从基部切下,转移到壮苗生根培养基中,然后放入培养室中在25℃-28℃的温度下培养,光照强度为5000-6000勒克斯,每天12小时。20天左右即可开始生根,35天即可进行炼苗。移栽前,将大花蕙兰瓶苗移入遮阳棚,在自然散射光(7000 ~ 8000勒克斯)环境下放置15 ~ 20天,每天光照时间8 ~ 12小时,可明显提高瓶苗质量和种植成活率。当瓶苗叶片浓绿,叶片坚实,植株健壮时,即可移出瓶外。