多肽润饰（磷酸化合成多肽的润饰技巧）固相方法合成磷酸化肽分两种方法:
（1）预制磷酰化构件，然后组装到肽链一载体上(Building block法);
（2）肽链一载体磷酰化（global phosphorylation）。
最初制备磷酰化的Tyr、Thr及Ser时，多用磷酸的双甲酯、苄酯及叔丁酯情势参与对这3种AA的酰化。
磷酸化合成多肽的润饰-专肽生物
为了避免液相法预制操作的麻烦，可用上述的相似条件直接酰化含有Ser 、 Thr或Tyr的肽树脂：
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也可以应用不带烷基酯的Fmoc一Tyr[PO3H2]一OH作百思特网为构件，缩合到肽树脂上。这种方法对短链的磷肽制备是可行的。对长肽而言，缩合收率会受到影。尤其是当两个磷酞化的残基在肽链上相邻时，会产生脱水而发生焦磷酰型副产物的麻烦。此外，当被磷酰化的残基是Ser时，因-Ser [PO3H2]一的百思特网位阻较小，在脱除--氨基上的Fmoc时在Ser上产生清除，生成脱氢丙氨酸残基（Dha），同时脱掉磷酰基。为了避免上述麻烦。许多试验室建议应用单苄酯的构件Fmoc一AA一[PO( OBzl) OH]一OH最为幻想。较近的研讨发明，单苄酯磷酸化
构件对固相氨基组分的最佳缩合条件为：
Fmoc一AA一[PO( OBz百思特网l) OH]一OH/HBTU（或TBTU）/HOBT/DIEA（1:1：1:2）磷酰构造中的单苄酯与Wang树脂的裂解条件一样，即95%TFA/H2O/1~2h。
一些研讨表明，肽链在载体上组装完成后再进行的固相磷酰化方法似乎更为适用，因为它可以综合Boc及Fmoc两种方法于同一合成中，而且产物中可以存在磷酰化的残基及游离侧链的Ser、 Thr两种情势（图1），为构造一活性关系研讨供给了丰硕的样品资源。
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（图1）先组装肽链(原创www.isoyu.com版权)后磷酰化的固相磷肽合成
（图1） 的合成中先后组装了Tyr8、Thr6、Ser4这3个带羟基侧链的残基。依据设计请求。Ser6是被磷酰化的位点，Thr4及Tyr8掩护侧链游离基。因此从一开端就对Ser4不加任何侧链掩护，得以与另两个残基差别看待。